Le Laboratoire Clients d’AJINOMOTO EUROLYSINE S.A.S. applique des méthodes normalisées et/ou officielles ou des méthodes internes :

• Dosage des protéines
  (Norme NF EN ISO 16634-1)
• Analyse des acides aminés totaux et libres autres que le tryptophane dans les matières premières et aliments
  (Règlement N° 152/2009 - norme NF EN ISO 13903)
• Analyse du tryptophane libre et total dans les matières premières et aliments
  (Méthode interne)
• Analyse des acides aminés dans les produits purs et premix
  (Méthode AOAC 999.13)

Les méthodes sous accréditation sont mentionnées dans l’annexe technique du Cofrac.
Télécharger l'annexe technique

 

 

Réception et préparation des échantillons

 

1. Réception et enregistrement des échantillons
   L'échantillon est d'abord réceptionné et enregistré dans le Lims
2. Broyage des échantillons
   L'échantillon doit alors être broyé avant analyse
3. Salle de pesées
   Les analyses peuvent commencer avec d'abord une pesée de l'échantillon

 

Réalisation des analyses

 

Dosage des protéines (Norme NF EN ISO 16634-1)

 

La teneur en azote total est déterminée par la méthode DUMAS. Cette méthode consiste en une combustion « flash » à haute température de l'échantillon. Les différents éléments de l'échantillon (C, H, N, S, O) se retrouvent sous forme gazeuse (CO2, H2O, Nox, SO2, halogènes, O2 en excès…). Différents pièges ainsi que des catalyseurs d'oxydation et de réduction permettent de ne conserver que N2. Ce gaz est ensuite dosé grâce à un détecteur catharométrique dont le principe de détection est lié à la conductibilité du gaz à doser.

 

 

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Acides aminés totaux autres que le tryptophane dans les matières premières et les aliments (Règlement N° 152/2009 - norme NF EN ISO 13903)

 

La détermination des acides aminés totaux est réalisée en double sur chaque échantillon après hydrolyse acide des protéines :

• une hydrolyse à reflux pendant 23 heures à 110°C. Cette hydrolyse permet d'obtenir tous les acides aminés sauf la Méthionine et la Cystine
• une hydrolyse à reflux pendant 23 heures à 110°C après une oxydation performique de la Méthionine (transformée en Méthionine sulfone) et de la Cystine (transformée en Acide cystéique). Cette hydrolyse permet d'obtenir tous les acides aminés sauf la Tyrosine et la Phénylalanine qui doivent être déterminées sur une hydrolyse sans oxydation

Les hydrolysats sont ajustés à un pH de 2,20 et les acides aminés sont séparés par chromatographie d'échange d'ions puis déterminés par détection photométrique à 570 nm (440 nm pour la proline) après réaction avec la ninhydrine. La méthode ne permet pas le dosage de la Méthionine Hydroxy-analogue.

 

Description du dosage des acides aminés

 

bains de sable pour les hydrolyse

Ajustement du pH des hydrolysats

Appareil de dosage des AA

 

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Tryptophane total (Méthode interne issue de la norme abrogée AFNOR XP V18-114)

 

La détermination du tryptophane est réalisée en double sur chaque échantillon après hydrolyse basique des protéines.

 

L’hydrolyse des protéines se fait par chauffage avec de l'hydroxyde de baryum dans un autoclave à 120°C pendant 16 heures. Les hydrolysats sont acidifiés avec de l’acide chlorhydrique à pH 3,0.

 

Le tryptophane des hydrolysats est séparé par chromatographie liquide haute performance en phase inverse et déterminé par détection fluorométrique.

 

Description du dosage du tryptophane

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Dosage des acides aminés et tryptophane libres

 

Dosage des acides aminés et tryptophane libres dans les aliments

 

Acides aminés libres autres que le tryptophane (Règlement N° 152/2009 - norme NF EN ISO 13903)
Les acides aminés sont extraits par de l'acide chlorhydrique 0,1 mol/l. Les macromolécules azotées co-extraites sont précipitées à l'aide d'acide sulfosalicylique et éliminées par filtration. La solution filtrée est ajustée à pH = 2,2. Les acides aminés sont séparés sur résines échangeuses d'ions et dosés par détection photométrique à 570 nm après réaction avec la ninhydrine sur un appareil spécifique de dosage des acides aminés.

 

Tryptophane libre (Méthode interne)
Le tryptophane libre est extrait avec de l'acide chlorhydrique 0,1 N.
Le tryptophane des extraits est séparé par chromatographie liquide haute performance en phase inverse et déterminé par détection fluorométrique.

 

Dosage des acides aminés libres dans les produits purs ou sur support (premix)

 

Acides aminés libres autres que le tryptophane ( Méthode AOAC 999.13)
La détermination de la teneur en acides aminés dans les produits commerciaux, dans les prémix et concentrés contenant plus de 2 % de ces acides aminés, est réalisée sur un appareil analyseur d'acides aminés.
Les acides aminés sont extraits avec de l'acide chlorhydrique 0,1 mol/l, séparés sur résines échangeuses d'ions et dosés par détection photométrique à 570 nm après réaction avec la ninhydrine.

 

Tryptophane libre (Méthode interne)
Le tryptophane libre est extrait avec de l'acide chlorhydrique 0,1 N.
Le tryptophane des extraits est séparé par chromatographie liquide haute performance en phase inverse et déterminé par détection fluorométrique.